檢測原理: 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被豬柯薩奇病毒Ⅲ型抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬柯薩奇病毒Ⅲ型（CoxV III）的存在與否。

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒組成：

結(jié)果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒性能：

1.  準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

3.  重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

實驗注意事項：

1）待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。
2）要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。

3）要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭；吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差；用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

4）實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5）實驗時，要使底物避光保存；底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配；底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

6）將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

7）溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。溫浴時間應遵守試劑盒規(guī)定。
8）洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9）洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
10）應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確性。對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。

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